ИФА-анализ крови: когда применяется?
Всем известно, что лечению любого заболевания предшествует диагностика. Чем раньше и точнее поставлен диагноз, тем больше шансов на успешное и полное излечение пациента. О том, что представляет собой такой анализ, как ИФА, кому он назначается и как «работает», рассказывает врач-детский инфекционист «Клиника Эксперт» Тула Елена Геннадьевна Королёва.
— Елена Геннадьевна, ИФА-анализ крови — что это такое? Расскажите о его принципе.
— С помощью иммуноферментного анализа (сокращённо ИФА) происходит выявление в крови специфических антител, представляющих собой молекулы иммуноглобулинов (часто обозначаются так: Ig). Антитела вырабатываются иммунной системой организма в ответ на внедрение в него чужеродных агентов — например, вирусов, бактерий. То есть этот анализ показывает реакцию организма на инфекцию, которая была у человека или присутствует в настоящее время. Это так и называется: ИФА-анализ на антитела. Самих возбудителей болезни, их антигены, с помощью этого вида анализа не найти.
«Каковы отличия вирусов и бактерий, и какое это имеет значение при лечении инфекционных заболеваний?». Цитата из материала «Вирусы и бактерии — в чём принципиальное отличие?»
Есть несколько классов иммуноглобулина, которые образует иммунная система. Они вырабатываются в зависимости от срока внедрения патогена в организм и по-разному называются. Например, наличие иммуноглобулина класса M (IgM) свидетельствует об острой фазе инфекционного процесса — значит, человек болен именно в этот конкретный момент. А вот иммуноглобулин G (IgG) начинает вырабатываться после двух недель борьбы организма с инфекцией. Если присутствуют оба типа, это говорит о том, что инфекция протекает уже относительно длительное время, но острая фаза пока ещё не закончилась. Но в случае, когда присутствует хроническая инфекция, появление IgМ может говорить о её обострении и течении острой фазы на фоне хронического процесса.
Хотите подробнее узнать об иммунной системе? Читайте нашу статью
— Когда назначается иммуноферментный анализ? Метод используется только для диагностики инфекций?
— Метод ИФА назначается, если врач заподозрил у пациента не явную, скрытую инфекцию, и её предстоит выявить. Ещё этот метод выступает в роли скрининга после прививок: он применяется, когда необходимо определить, есть ли у человека защита, скажем, от кори или иных инфекционных заболеваний — то есть анализ показывает, имеются ли антитела к тем или иным инфекциям, надо этого человека прививать или нет.
Читайте материалы по теме:
Непривитые дети — самые здоровые? Прививки: где правда, а где ложь? Кто придумал прививки?
— Что может выявить ИФА крови?
— Если лаборатория обладает определёнными возможностями, иммуноферментный анализ может выявить абсолютно любую инфекцию. Например, разработан ИФА анализ крови на паразиты (в том числе на гельминты), на герпес, гепатит и многие другие инфекционные патогены. Для выполнения теста нужно соответствующее оборудование, скрининговые программы. Но есть и ещё один существенный момент. Современные лабораторные анализаторы устроены так, что одному человеку ИФА не делается, т. е. необходимо ждать, когда пациентов, которым надо сделать такой же анализ, наберётся определённое количество, только тогда лаборатория возьмётся за эту работу. Например, для выявления ветряной оспы какой-то лаборатории нужны как минимум 50 человек. И это зависит не от прихоти её сотрудников — дело в том, что для лаборатории рентабельнее делать именно несколько анализов одновременно. Поэтому, чтобы меньше ждать, лучше обращаться в крупные лаборатории с большой проходимостью пациентов.
— Насколько чувствителен иммуноферментный анализ? Есть ли вероятность того, что он не обнаружит свою «цель», в то время как она в организме есть? И если да, то почему такое может быть?
— Если под целью подразумевать сам вирус, то, повторю, ИФА это не делает, его задача — обнаружить именно реакцию организма на инфекцию, специфические антитела к патогену. Если же под целью понимаются антитела, то, к сожалению, бывает и так, что ИФА их не обнаруживает. Результат может оказаться как ложноположительным, так и ложноотрицательным. Например, у беременных женщин со второй группой крови зачастую получают ложноположительный анализ на гепатит С. Т.е. на самом деле никаких антител к вирусу гепатита С в организме этой женщины нет, а анализ говорит об обратном. Увы, современная медицина затрудняется объяснить это. Поэтому, если врач наблюдает явные симптомы, видит, что человек болен, но при этом полученные результаты ИФА отрицательны, надо идти дальше и назначать другой, более специфичный анализ.
Кстати, ложноположительный результат на гепатит С может получиться и в случае, если накануне сдачи анализа человек выпил красного вина. В подобных случаях очень многое зависит от опыта врача, и ему решать, верить результатам анализа или продолжать исследования.
Подробнее о гепатите С читайте в нашей статье
— Есть ещё один современный анализ, известный как ПЦР — полимеразная цепная реакция. Она не может заменить иммуноферментный анализ? Если нет, то почему?
— Знаете, для инфекциониста это звенья одной цепи, одного процесса. В отличие от ИФА, ПЦР выявляет непосредственно ДНК или РНК самого вируса или бактерии. Но здесь одна особенность. Брать секрет нужно непосредственно из очага поражения — оттуда, где этот вирус или бактерия размножается. Скажем, гепатиты или ВИЧ — да, их можно обнаружить с помощью ПЦР, взяв у больного кровь. А вот если у человека пневмония, вызванная каким-то экзотическим грибком, анализ крови покажет отрицательный результат, и надо брать мокроту непосредственно из лёгких посредством бронхоскопии. Если речь идёт о других органах — скажем, о печени, — проводится биопсия.
Кроме того, ПЦР может показать ложноположительный результат, отреагировав на какие-то «обломки» молекул вируса — при том, что самого вируса, инфекции как таковой в организме уже может не быть. То есть противопоставлять эти два метода диагностики нельзя. ИФА и ПЦР неразрывно связаны между собой и дополняют друг друга, сводя к минимуму риск постановки неверного диагноза.
Беседовал Игорь Чичинов
Редакция рекомендует:
Диагностика инфекций методом ПЦР: что это такое? Микроб, открой «личико»! Чем опасны ТОРЧ-инфекции?
Для справки
Королёва Елена Геннадьевна
В 1992 г. окончила педиатрический факультет Киргизского государственного медицинского института.
С 1992 по 1993 г. — интернатура по детской инфекции.
Работала в республиканской инфекционной больнице (г. Бишкек) детским инфекционистом. Затем — реаниматолог в отделении интенсивной терапии для инфекционных больных. В Туле более 10 лет работала в областной детской больнице, 7 лет заведовала отделением реанимации.
В настоящее время — врач, детский инфекционист, детский анестезиолог-реаниматолог «Клиники Эксперт» Тула. Принимает по адресу: г.Тула, ул. Болдина,74.
Получение специфического комплекса на твердой фазе
После получения иммуносорбента к нему последовательно добавляют другие специфические реагенты, в результате чего на твердой фазе формируется многослойный комплекс. Природа специфических реагентов может быть разной. Определяющими моментами на этих стадиях ИФА являются специфичность реакции, характеризующаяся величиной константы связывания, и кинетика процессов.
В ИФА основной специфической реакцией является взаимодействие антигена с антителом.
Антитела, или иммуноглобулины представляют собой белки, реагирующие с антигеном, который индуцировал их образование. Они состоят из 2 пар цепей, соединенных между собой дисульфидными связями. Внутри каждой пары (легкая L и тяжелая Н) цепи между собой идентичны. В зависимости от типа Н-цепей иммуноглобулины подразделяют на 5 классов. Легкие цепи делят на 2 типа, обозначаемые κ (капа) и λ (лямбда). Оба типа L-цепей входят в состав всех 5 классов иммуноглобулинов. Такие классы как ИгГ (IgG), ИгД (IgD), ИгЕ (IgE) находятся в виде мономеров, ИгМ (IgM) встречается преимущественно в виде пентамера, а ИгА (IgA) — в виде моно-, ди- и тетрамеров. По результатам протеолиза такими ферментами, как папаин и пепсин, в иммуноглобулинах выделяют Fab- и Fc-фрагменты. Специфической активностью по отношению к антигену обладают Fab-фрагменты, Fc-участок отвечает за основные эффекторные функции антител.
Антигенами называются вещества или структуры, способные вызывать иммунный ответ. Как правило, антигены имеют многочисленные детерминанты (эпитопы); к которым специфичны активные центры Fab-фрагментов образующихся антител. Набор детерминант определяет специфичность антигена, а их число его валентность. Для антигенной специфичности белков имеет значение их конформация. Изменение конформации при денатурации белка приводит к потере некоторых детерминант. В основе взаимодействия перекрестно реагирующих антител с антигенами лежит структурное сходство с детерминантами специфического антигена.
Прочность связи Fab-фрагмента с антигенной детерминантой называется аффиностью и определяется величиной константы равновесия данной реакции. Для поликлональной сыворотки эта величина будет различной для тех молекул антител, которые являются продуктами разных В-клеток. В случае моноклональных антител такие различия исчезают. Так как антитела многовалентны (от 2 для ИгГ до 10 для ИгМ), то для характеристики прочности связывания антител с соответствующим антигеном вводят термин авидность. Она зависит от аффинности Fab-фрагментов и валентности антител.
Наряду с реакцией антиген-антитело, широкое распространение в ИФА получил белок А из-за своей способности специфически взаимодействовать с Fab-фрагментами многих иммуноглобулинов.
В последние годы широкое распространение в ИФА получила реакция между биотином и авидином (стрептавидином), позволяющая осуществлять связь между различными компонентами специфического комплекса на твердой фазе.
В ИФА используется также специфическая реакция между лектинами и углеводными остатками различных гликопротеинов.
Устранение неспецифических взаимодействий на этапе промывки
После каждого этапа инкубации специфического реагента с твердой фазой следует этап промывки. Ее цель заключается в получении моно-молекулярного слоя первого специфического реагента и устранении взаимодействий реагент — твердая фаза после инкубации последующих реагентов, а кроме того, в уменьшении количества перекрестно реагирующих антигенов со специфическим реагентом.
В результате сорбции первого специфического реагента происходит образование вначале мономолекулярного слоя на твердой фазе, а затем многослойной сорбции за счет белок-белковых взаимодействий. Добавление в промывной раствор неионных детергентов типа твин-20 позволяет осуществлять эффективную конкуренцию между белок-белковыми взаимодействиями за счет взаимодействия белок-детергент. Это же взаимодействие уменьшает сорбцию белка на твердой поверхности после частичного разрушения мономолекулярного слоя. Так как все эти процессы равновесные, то для более полного устранения многослойной сорбции необходима многократная промывка твердой фазы.
Назад
Какая роль метод ИФА в диагностике сифилиса
Метод ИФА в диагностике сифилиса был впервые применен в 1975 год.В настоящее время он широко применяется для серологической диагностики сифилиса в России и используется как потверждающий тест на сифилис.Обычно проводят исследование,выявляющее так называемые суммарные антитела к антигенам бледной трепонемы (IgM и IgG),хотя в отдельных случаях возможно и определение только «ранних» антител класса М.ИФА при сифилисе становится положительным после 3 недели с момента инфицирования и остается положительным довольно длительное время даже после лечения (иногда всю жизнь).Поэтому как тест,подтверждающий излечение сифилиса,ИФА не используется.В большинстве случаев проводится только качественное определение ИФА — т.е. только положительный или отрицательный результат,хотя возможно и количественное определение.
